Передовые технологии: Ветеринарная медицина

Опубликовать статью

Оценка специфичности селективной питательной среды для выделения Pseudomonas aeruginosa

Отдельные представители семейств Pseudomonadaceae и Aeromonadaceae имеют большое эпидемическое и эпизоотическое значение [1-4]. Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка) – наиболее известный патоген способный вызывать широкий спектр инфекционных патологий у животных и человека. [5, 3].

Цель нашей работы: оценить специфичность питательной среды и выработать методические подходы для дифференциации псевдомонад от других таксонов микроорганизмов.

Материалы и методы: Первичную изоляцию культур проводили на питательной среде с цетримидом для изоляции Pseudomonas (BioRad). Культуры тестировали на каталазную, цитохромоксидазную активности, синтез пигментов, антибиотикорезистентность. Бетта-галактозидазную, триптофандезаминазную и глюкуронидазную активности определяли на среде Уриселект 4 (BioRad). Культуры не образующие зеленого и флюоресцирующего пигмента дополнительно типировали методом ПЦР и/или секвенировали фрагмент гена 16S рибосомальной РНК.

Работа выполнена в рамках межакадемического интеграционного проекта СО РАН № 46.

Результаты собственных исследований и обсуждение

Выделение P.aeruginosa и других, родственных микроорганизмов, проводили с использованием с цетримидом для изоляции Pseudomonas aeruginosa. Колонии образующие зеленый, коричневый и флюоресцирующий пигменты дополнительно типировали биохимически и ПЦР [5] на принадлежность к виду Pseudomonas aeruginosa .

Отдельной проблемой являлась идентификация беспигментных изолятов, для дифференциации от микроорганизмов, не относящихся к родам Pseudomonas, Aeromonas, культуры пересевали на среду уриселект 4 что позволяло исключить клебсиелл, протеев и цитробактеров по отсутствию глюкуронидазной и триптофандезаминазной активности. Культуры отрицательные в ПЦР с праймерами специфичными к Pseudomonas aeruginosa, но обладающие биохимическими характеристиками свойственными микроорганизмам Pseudomonas, Aeromonas идентифицировали путем секвенирования. Пять культур Aeromonas hydrophila были изолированы из внутренних органов кур  погибших от инклюзионного гепатита (аденовирусная инфекция) при гистологическом исследовании в патологическом материале процессов ассоциирующихся с терминальной формой бактериальной инфекции не отмечалось. От этой же птицы с использованием среды с цетримидом для изоляции Pseudomonas aeruginosa были также выделены культуры Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii, Proteus mirabilis, что свидетельствует о необходимости дополнительного типирования культур выросших на этой среде. Семь культур Pseudomonas fluorescens были изолированы от цыплят – бройлеров при подозрении на иерсиниоз (наблюдалась повышенная смертность бройлеров с признаками энтеритов, гепатитов и сепсиса). Культуры не являлись патогенными для пятидневных цыплят при внутрибрюшинном заражении, но вызывали локальные воспалительные процессы по месту введения и пневмонию у лабораторных мышей.

Бактериологическая диагностика псевдомоноза ассоциированного с колибактериозом, на фоне кормовой бактериальной токсикоинфекции, была затруднена ассоциированным заражением кишечной палочкой, которая высевалась в большем количестве чем СГП. В данной ситуации использование селективной среды для выделения P. aeruginosa с цетримидом или ПЦР показали высокую эффективность.

Заключение: обнаружение во внутренних органах сельскохозяйственной птицы потенциально патогенных микроорганизмов таких как: Aeromonas hydrophilа, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii, Proteus mirabilis не позволяет использовать селективную питательную среду в качестве единичного этапа изоляции псевдомонад. Однако в сочетании с дополнительными тестами селективная среда может использоваться для изоляции всех вывшеперечисленных видов бактерий.

Литература:

1. J. B.Kaper , H. Lockman, R. R. Colwell & S. W. Joseph.  Aeromonas hydrophila: ecology and toxigenicity of isolates from an estuary./ Journal of Applied Microbiology 1981; vol. 50 (2); pp. 359-377.

2. Martin-Carnahan, A., & S. W. Joseph. 2005. Genus I. Aeromonas Stanier 1943, 213. In G. M. Garrity, D. J. Brenner, N. R. Krieg & J. T. Staley (eds) Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2nd ed., vol. 2. The Proteobacteria. Part B. The Gammaproteobacteria, pp. 557-578. Springer.

3. Williams B.J., Newkirk H.L. Pseudomonas infection of one-day chicken resalting from contaminated antibiotic solutions. /Avian Dis. 1966; Vol.10; pp.353-356.

4. Isabelle Arnaut-Rollier, Lieven De Zutter and Jan Van Hoof  Identities of the Pseudomonas spp. in flora from chilled chicken / International Journal of Food Microbiology Vol. 48, Issue 2, 1 May 1999, pp. 87-96.

5. Юшков Ю.Г., Афонюшкин В.Н. Коптев В.Ю. с соавт., Использование ПЦР в системе контроля псевдомоноза и пастереллеза с.-х. птицы / Россельхозакадемия. Сибирское отделение. ГНУ ИЭВСиДВ, -Новосибирск, 2007. - 22 с.

В.Н. Афонюшкин,
ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии,
г. Новосибирск, Россия
 
Е.А.Храпов, О.В.Мишукова, Е.В. Дударева,
ИХБФМ СО РАН,
г. Новосибирск, Россия,
E-mail: lisocim@mail.ru
 

Выражаем автору благодарность. Статья публикуется и удаляется самостоятельно по желанию автора. Публикация носит исключительно научно-ознакомительный некоммерческий характер и предназначена содействовать в популяризации имени автора, его работы среди широкого круга ученых и практиков АПК. Приводится в авторской редакции, ответственность за достоверность данных несет автор. Редакция вправе устранять грамматические и пунктуационные погрешности, а также корректировать верстку материала. Все права на картинки и тексты принадлежат автору, любое их воспроизведение возможно только с его разрешения. Для связи с автором используйте указанный им адрес электронной почты, либо обратитесь в редакцию журнала. При возникновении любых претензий относительно авторских прав, пожалуйста, немедленно сообщите в редакцию. По первому требованию автора любые его материалы будут немедленно удалены, а инцидент улажен. В научных работах и для ВАК на эту статью можно и необходимо ссылаться по ГОСТ Р 7.0.5 2008 (статья может быть обнародована не впервые)

УДАЛИТЬ СТАТЬЮ | ПОЖАЛОВАТЬСЯ | ЗАДАТЬ ВОПРОС
АгроПоиск - аграрная поисковая система
АгроПоиск - аграрная поисковая система