Использование ПЦР для индикации респираторно-синцитиального вируса КРС

Ветеринарная медицина / 30 ноября 2012


Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота наносят огромный экономический ущерб животноводству, особенно при условии его интенсивного ведения. В хозяйствах мясо-молочного направления они чаще протекают по типу «энзоотической бронхопневмонии». В связи с тем, что многие возбудители, участвующие в их этиологии, убиквитарны, а взрослые животные часто имеют иммунитет, они чаще возникают у телят в период между снижением пассивного и выработкой активного иммунитета.

         Одним из многих возбудителей, вызывающих болезни органов дыхания у крупного рогатого скота, является вирус респираторно-синцитиальной инфекции (РСИ), относящийся к семейству парамиксовирусов, роду – пневмовирусов. Клинически болезнь проявляется, в основном, поражением нижних отделов респираторного тракта, повышением температуры, затрудненным дыханием, одышкой, выделениями из носа, сильным кашлем с последующим развитием интерстициальной бронхопневмонии и эмфизем.

Вирус был выделен впервые от крупного рогатого скота с симптомами острого респираторного заболевания Paccaud M.F. et al. в 1970 г. В настоящее время РС-инфекция крупного рогатого скота регистрируется во всех странах мира с развитым животноводством, а в нашей стране с 1975 г.

В отличие от других вирусных респираторных инфекций она остается недостаточно изученной в связи со сложностью выделения и культивирования возбудителя. Трудности культивирования, в свою очередь, затрудняют получение вирусного сырья в достаточном количестве и с высокой инфекционной активностью для изготовления диагностических препаратов и средств специфической профилактики.

         Диагностика болезни осуществляется на основании эпизоотологических и клинических данных, патологоанатомических изменений с обязательным лабораторным подтверждением. Классическим методом диагностики считается выделение вируса в чувствительных культурах клеток, однако он обладает очень низкой чувствительностью, а также является длительным и трудоемким. Результат выделения вируса в культурах клеток во многом зависит от правильного отбора, хранения и транспортировки проб биоматериала от больных животных. Выделение вируса затруднено ввиду его чрезвычайной лабильности. Выделить его от больных животных можно только на ранней стадии инфекции, и ве­роятность выделения снижается с появлением признаков заболе­вания. Из проб носовых выделений, трахеальной и бронхиальной жидкости, легких и бронхов вирус можно выделить только на 2-11-й день после инфицирования животных. Выделение возбудителя возможно из свежего материала, а также хранившего­ся 3-5 ч при 4°С или быстрозамороженного и хранившегося при -70°С.

         В связи с низкой эффективностью вирусологического метода перспективным  является ОТ-ПЦР в сочетании с ретроспективной серологической диагностикой.

         Разработка ОТ-ПЦР для выявления респираторно-синцитиального вируса во многих странах началась в конце прошлого столетия. Чаще мишенями для амплификации являются участки генов, кодирующих протеины F и G вируса.

         Во всех случаях ПЦР показала большую чувствительность и специфичность по сравнению с вирусологическими исследованиями. Выявление вируса в ПЦР коррелировало с наличием клинических признаков у животных. Многие авторы считают, что в связи с трудностями выделения вируса в культурах клеток, ПЦР может служить эффективным методом для его идентификации при респираторных болезнях телят. Более высокая чувствительность ПЦР на протеин F рекомендована в качестве альтернативного стандартным вирусологическим методикам метода анализа клинических образцов.

Сотрудниками ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии разработана тест-система для выявления вируса респираторно-синцитиальной инфекции методом ПЦР. Авторы использовали праймеры на высоконсервативный ген протеина F вируса. В данном варианте тест-система является универсальной, чувствительной, специфичной и выявляет РНК тестированных штаммов и изолятов вируса, выделенных от животных в культурах клеток, а также на ранних стадиях размножения вируса в них, т.е. до наступления видимого цитопатического действия. В лабораторных испытаниях чувствительность ПЦР составила 10 ТЦД50/мл. Тест-система показала высокую эффективность при диагностике болезни в производственных условиях.

Метод ПЦР прост по технике исполнения, информативен, экономически целесообразен и позволяет выявлять РНК вируса в короткие сроки. При этом возможно одновременное исследование большого количества проб. Разработанная ПЦР пригодна для рутинных диагностических исследований в региональных лабораториях с целью выявления вируса РСИ КРС в пробах биологического материала от животных при отсутствии возможности проведения вирусологических исследований. Может быть рекомендована для выявления вируса как после предварительного выделения в перевиваемых культурах клеток, так и без него.

А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, К.В. Войтова
ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии
Новосибирская область, п. Краснообск, Россия
 
И.Я. Строганова
ФГОУ ВПО «Красноярский ГАУ»
Красноярск, Россия
 

Источник: BORONA.net



Другие статьи