Определение токсичности концентрата из пантов, прошедших обработку химическими веществами
Переработка сельскохозяйственного сырья / 02 сентября 2013
Пантовый порошок, полученный после обезволашивания пантов маралов химическими реагентами, может служить источником длительного повторного воздействия на организм человека мигрирующих из него химических веществ. В связи с этим возникает необходимость прогнозировать опасность сенсибилизирующего, гонадотоксического, эмбриотоксического, тератогенного, мутагенного и бластомогенного действия. Установление факта возможного развития отдаленных эффектов под действием изучаемых веществ является важной задачей биологического эксперимента и имеет большое значение при решении вопроса о возможности использования продукта по назначению и гигиенической регламентации.
Пантовый порошок, полученный после обезволашивания пантов маралов химическими реагентами, может служить источником длительного повторного воздействия на организм человека мигрирующих из него химических веществ. В связи с этим возникает необходимость прогнозировать опасность сенсибилизирующего, гонадотоксического, эмбриотоксического, тератогенного, мутагенного и бластомогенного действия. Установление факта возможного развития отдаленных эффектов под действием изучаемых веществ является важной задачей биологического эксперимента и имеет большое значение при решении вопроса о возможности использования продукта по назначению и гигиенической регламентации [1].
Исследование токсических свойств пантового концентрата, в технологический процесс которого входило обезволашивание химическими веществами: сульфид натрия, гидрооксид натрия и гидрооксид кальция проводилось на лабораторных животных – белых мышах. Изучение токсичности нового способа обезволашивания пантов маралов проводилось на лабораторных животных.
Целью исследования было установить безопасность применения химических реагентов в качестве обезволашивающего раствора свежесрезанных пантов маралов.
Для эксперимента были взяты здоровые животные обоего пола и возраста 2 месяца. При исследовании на токсичность пантового концентрата учитывались ответные реакции организма: имеется ли клиническая картина отравления, регистрация физиологических, биохимических реакций при помощи специфических и неспецифических методов исследования [2].
Опытным животным перорально вводили раствор пантового порошка, предварительно разведенный в теплой дистиллированной воде. Данный пантовый порошок был получен из пантов марала, обезволошенных химическим способом (сульфид натрия, гидрооксид натрия и гидрооксид кальция). Животных до начала опыта взвешивали, затем давали опытный раствор и далее осуществляли кормление по рациону. Контрольная группа получала дистиллированную воду в том же количестве.
С целью определения клинической картины брали кровь мышей, которая является важнейшей частью внутренней среды организма. В кровь поступают продукты клеточного и тканевого обмена. Все изменения в функциях отдельных органов и систем организма отражаются на составе крови. Поэтому изучение физиологических и морфологических особенностей крови имеет большое значение при токсикологических исследованиях.
В токсикологическом эксперименте изучение морфологического состава крови применяли в хроническом опыте для выявления состояния организма животных. Кроме того, изучаемые вредные вещества могли действовать на форменные элементы крови специфически и вызывать характерные изменения.
Кровь у лабораторных мышей брали из сердца. Для определения количества эритроцитов и лейкоцитов кровь стабилизировали гепарином и осуществляли подсчет в камере Горяева [3].
Результаты исследований по определению токсичности пантового порошка после обезволашивания пантов химическим раствором представлены показателями клинической картины крови в таблицах 1, 2.
Таблица 1 – Показатели периферической крови лабораторных животных
|
|
Количество эритроцитов, млн/мл
|
|||||
|
1 мышь
|
2 мышь
|
3 мышь
|
4 мышь
|
5 мышь
|
Среднее
|
|
|
Опыт
|
8,17
|
7,94
|
9,58
|
8,44
|
9,32
|
8,69±0,32
|
|
Контроль
|
7,67
|
8,56
|
8,81
|
9,05
|
8,45
|
8,05±0,23**
|
*р<0,05, **р<0,01 – разница статистически достоверна, в сравнении с предыдущим значением
Достоверное отличие установлено при определении количества эритроцитов, при этом больше их обнаружено в крови мышей, находящихся на опыте, что, возможно, обусловлено кормлением животных пантовым порошком. Полученные результаты находятся в пределах установленной нормы.
Таблица 2 – Показатели периферической крови лабораторных мышей
|
|
Количество лейкоцитов, тыс./мл
|
|||||
|
1 мышь
|
2 мышь
|
3 мышь
|
4 мышь
|
5 мышь
|
Среднее
|
|
|
Опыт
|
9,0
|
10,1
|
10,7
|
9,7
|
8,9
|
9,68±0,33
|
|
Контроль
|
9,45
|
10,6
|
9,2
|
10,9
|
9,75
|
9,98±0,32
|
Определение количества лейкоцитов в крови показало, что животные не испытывают токсического отравления, а полученные показатели находятся в пределах нормы.
С целью подсчета лейкоцитарной формулы и изучения особенности морфологии крови были приготовлены мазки на предметных стеклах. Далее лейкоцитарная формула была определена под микроскопом (рис.1).
Рисунок 1 – Лейкоцитарная формула, %
По результатам изучения показателей лейкоцитарной формулы достоверных отличий не выявлено. Все составляющие показывают отсутствие патологических процессов в организме вследствие того, что значения лейкоцитарной формулы не выходят за пределы нормы.
Известно, что вес внутренних органов лабораторных мышей может изменяться под влиянием токсических веществ. Благодаря чувствительности этого показателя обычно каждый эксперимент заканчивается определением веса внутренних органов животных. Взвешивание органов подопытных и контрольных мышей осуществляли после убоя животных. Непосредственно перед забоем лабораторных мышей взвешивали. Взвешивание внутренних органов производили на торсионных весах. Для опыта были взяты паренхиматозные органы (печень, селезенка, почки) и сердце (табл.3).
Таблица 3 – Весовые коэффициенты органов лабораторных мышей
|
|
Вес органов, мг
|
||||
|
Сердце
|
Печень
|
Почка
|
Почка
|
Селезенка
|
|
|
Опыт
|
0,0052±0,00
|
74,35±0,34
|
0,0077±0,00
|
0,0083±0,00
|
0,0095±0,00
|
|
Контроль
|
0,0051±0,00
|
62,35±2,11
|
0,0072±0,00
|
0,0076±0,00
|
0,009±0,00
|
Получив абсолютные показатели веса органов, определили их весовые коэффициенты. Этот коэффициент определяет отношение веса органа в граммах к весу тела животного. Значения весовых коэффициентов, полученные у подопытных животных, сравнивали с таковыми у контрольных животных.
При вскрытии лабораторных мышей производили внешний осмотр внутренних органов и устанавливали наличие патологических изменений.
Таблица 4 – Макроскопическое исследование органов мыши в опыте и контроле
|
Внутренние органы
|
Патологоанатомические изменения
|
|
Показатель токсичности (LD150)
|
|
|
Сердце
|
Миокард полнокровный, красно-коричневого цвета, полости расширены, кровь свернувшаяся.
|
|
Печень
|
Красно-коричневого цвета, полнокровная.
|
|
Почки
|
Темно-коричневого цвета, полнокровные.
|
|
Селезенка
|
Вишневого цвета, гладкая блестящая с острыми краями.
|
|
Желудок
|
Слизистая оболочка розового цвета, не утолщена, без наложений.
|
Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии видимых изменений, которые напрямую бы указывали на токсичность применяемого пантового порошка.
Для определения токсичного действия пантового порошка, в частности, аспектов морфологических реакций печени, почек, селезенки на его пероральное введение лабораторным мышам, были проведены гистологические исследования вышеуказанных органов.
Материалом для исследований послужили органы от 5 контрольных и 5 опытных животных. Образцы фиксировали в 10% нейтральном формалине. Проводку осуществляли в спиртах восходящей концентрации. Из органов, залитых в парафин, изготавливали срезы толщиной 3-5 мкм. Препараты окрашивали общепринятым методом окраски – гематоксилином и эозином [4].
Микроскопия печени – основного органа детоксикации, и, как следствие, органа–мишени в организме, позволила увидеть типичную морфологическую картину, характерную для данного органа, без каких – либо изменений.
Исследование почек (основного органа выделения и выведения хим. веществ) также показало на отсутствие патологоморфологических изменений в структурных компонентах органа.
Изменений в структуре при гистологическом исследовании образцов селезенки не выявлено. Препараты органов контрольной и опытной групп наглядно демонстрируют сохранность архитектоники зон селезенки в обоих случаях.
Таким образом, длительное скармливание пантового порошка лабораторным мышам не оказало токсического воздействия на организм животных в виду отсутствия патоморфологических изменений в организме, которые в первую очередь демонстрируют поступление вредных веществ.
Для выявления действия токсических веществ на репродуктивную функцию животных определяется суммарный эффект на гонады самок и самцов. При наличии эффекта проводятся специальные исследования с целью выяснения причин нарушения репродуктивной функции.
Цель этого исследования – установить возможность развития отдаленных эффектов токсических веществ, которые могут вызвать гонадотоксическое, эмбриотоксическое, тератогенное, мутагенное и бластомогенное действия.
Для проведения исследований были взяты 1 самец и 3 самки в опыте и так же в группе контроля. Самцы и самки на опыте получали порошок из пантов до начала опыта за 30 дней и до достижения детенышами возраста 1 месяц.
В результате опыта лабораторные мыши имели срок беременности 24 дня и родили по 6 мышат, что соответствует нормально протекающим репродуктивным процессам.
Таким образом, в ходе токсикологических исследований не установлено вредного действия от применения химического раствора в качестве обезволашивающего агента свежесрезанных пантов, о чем напрямую свидетельствует отсутствие изменений в паренхиматозных органах, которые в первую очередь демонстрируют поступление вредных веществ в организм.
Литература:
1. Калетина Н.И. Токсикологическая химия. - М.; 2008. - 516 с.
2. Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва, 2005. - 829 с.
3. Елизарова О.Н. Пособие по токсикологии для лаборантов / О.Н. Елизарова, Л.В. Жидкова, Т.А. Кочеткова/ Медицина, 1974. – 168 с.
4. Волкова О.В. Основы гистологии с гистологической техникой / О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий. - М.: Медицина, 1982. – 304 с.
Источник: BORONA.net
